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一文帶你快速了解恒溫熒光擴增儀的原理

更新時間:2022-05-25 點擊量:1329
       恒溫熒光擴增儀主要是用來定量分析和確定基因轉錄水平的,而普通基因擴增儀是做定性分析和擴增基因片段,熒光定量基因擴增儀可以做普通基因擴增儀的工作,而反之就不行了,況且這樣代價太大了,一般的實驗室都不允許這樣做的。總之兩者的功能不能互相取代。
  普通基因擴增儀只能夠定性地分析是否存在目標片段。但是價格要低很多,而且運行成本也要低很多。不過不能直接得到擴增結果,還需要做電泳檢測。實際中檢測遺傳疾病,品種分子標記篩選,甚至親自鑒定等都可以由普通基因擴增儀完成。
  但是,某些需要定量的實驗就必須用到實時定量基因擴增儀了。比如檢測某些病原物的數量(血液乙肝病毒復制程度),特定基因的表達量(比如結合反轉錄做的RNA定量分析),某些基因在染色體組中拷貝數等等。熒光定量基因擴增儀一般不需要對擴增產物進行電泳分析,操作相對簡單些,但是耗材實在是貴。
  簡單來說,普通基因擴增儀只能擴增,不能檢測,便宜。熒光定量基因擴增儀除了擴增,還能在擴增的同時檢測DNA發出的熒光信號,試劑和儀器都更貴。
  恒溫熒光擴增儀原理:
  標記有熒光素的TaqMan探針與模板DNA混合后,完成高溫變性,低溫復性,適溫延伸的熱循環,并遵守聚合酶鏈反應規律,與模板DNA互補配對的TaqMan探針被切斷,熒光素游離于反應體系中,在特定光激發下發出熒光,隨著循環次數的增加,被擴增的目的基因片段呈指數規律增長,通過實時檢測與之對應的隨擴增而變化熒光信號強度,求得CT值,同時利用數個已知模板濃度的標準品作對照,即可得出待測標本目的基因的拷貝數。
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